慢病毒包裝服務
慢病毒簡介
慢病毒是逆轉錄病毒的一種，具有逆轉錄病毒的基本結構和特性：整合入宿主細胞基因組，長期表達，可用于轉基因動物制備；但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性：比逆轉錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細胞，更重要的，還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體，可以研究啟動子的調控、過表達特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝技術特點
病毒表達系統(tǒng) | 腺病毒表達系統(tǒng) | 慢病毒表達系統(tǒng) |
病毒基因組 | 雙鏈DNA病毒 | RNA逆轉錄病毒 |
自主復制 | 不能 | 不能 |
是否整合 | 病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時表達外源基因 | 病毒基因組整合于宿主基因組，長時間、穩(wěn)定表達外源基因 |
感染細胞類型 | 感染絕大多數細胞，包括分裂期、非分裂期細胞。 | 感染絕大多數細胞，包括分裂期、非分裂期細胞。 |
表達豐度 | 高水平表達 | 中水平表達 |
表達時間 | 快（1-2 天） | 慢（2-4 天） |
滴度 | 滴度可達10E12pfu/mL | 滴度可達10E9－10E10TU/mL |
克隆容量 | 可插入高達8kb的外源片段，滴度隨插入片段長度增加而降低 | 可插入不超過8kb的外源片段，滴度隨插入片段長度增加而降低 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
RNAi | 病毒進入細胞往往引起細胞內干擾素反應，一般情況下不適合做RNAi實驗 | 適合，是RNAi實驗的優(yōu)選工具 |
基因過表達 | 包裝容量較大，可以滿足較大基因的包裝，是過表達基因的優(yōu)選工具 | 包裝容量有限，過表達的基因過大時，病毒滴度受到影響 |
過表達microRNA | 適合 | 適合，是過表達microRNA實驗的優(yōu)選工具 |
下調microRNA | 有報道但不成熟 | 有報道但不成熟 |
是否可以自行擴增 | 可以 | 需要特殊包裝系統(tǒng)和包裝環(huán)境 |
A. 慢病毒載體的構建：
根據不同的研究需求構建慢病毒載體，如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過表達的慢病毒載體、用于啟動子活性研究的慢病毒載體等；
B. 慢病毒包裝過程：
將重組病毒質粒及其輔助包裝質粒共轉染至包裝細胞中，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在293T細胞中測定并標定病毒滴度。
C. 慢病毒包裝結果：
滴定濃度：1×107～1×108TU/ml
zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲存于PBS）
儲存：批量儲存的*條件為-80°C。
慢病毒包裝用途：
慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后，可用于:
· 感染原代細胞；
· 制備穩(wěn)定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株；
· in vivo的基因操作；
· 轉基因動物，特別是轉基因大鼠的制備。
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