簡要描述:熒光定量PCR檢測廠家由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應(yīng)用;實時熒光定量
熒光定量PCR檢測廠家與普通PCR的區(qū)別:理論上PCR是一個指數(shù)增長的過程,但是實際的PCR擴(kuò)增曲線并不是標(biāo)準(zhǔn)的指數(shù)曲線,而是S形曲線。
熒光定量PCR檢測廠家這是因為隨著PCR循環(huán)的增多,擴(kuò)增規(guī)模迅速增大,Taq酶、dNTP、引物,甚至DNA模板等各種PCR要素逐漸不敷需求,PCR的效率越來越低,產(chǎn)物增長的速度就逐漸減緩。當(dāng)所有的Taq酶都被飽和以后,PCR就進(jìn)入了平臺期。由于各種環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用,不同的PCR反應(yīng)體系進(jìn)入平臺期的時機(jī)和平臺期的高低都有很大變化,難以精確控制。所以,即使是96次PCR重復(fù)實驗,各種條件基本*,所得結(jié)果有很大差異,所以在實驗過程中我們不能根據(jù)zui終PCR產(chǎn)物的量直接計算出起始DNA拷貝數(shù)。
技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應(yīng)用;實時熒光定量
的方法:熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產(chǎn)物;而非特異性檢測方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過量熒光染料,熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號。前者由于增加了探針的識別步驟,特異性更高,但后者則簡便易行。